بداية الموسم مرة أخرى .تجربة وانغ" الطوب " مرة أخرى .
كيفممتازأنيقة تحمل الطوبلا يزاللا تحتاج إلى مساعدةأخي أختي

بالطبعمتابعة" الفصول الدراسية النمساوية الصغيرة "عمودلا

اليوم النمسا الصغيرة لك مقدمة
هو مقالكامل من البضائع الجافةال
دليل الممارسة على عرض بالعاثية
" التضخيم الكمي فج "

هذا هو واحد من الصعب تعلم السلطة علما
يرجى جمع !

الجزء الأول

ورم هجين、استنساخ خلية واحدةوعرض بالعاثية التكنولوجياهي ثلاث تقنيات رئيسية في اكتشاف الأجسام المضادة ، من بينهاعرض بالعاثية التكنولوجياكجائزة نوبل في التكنولوجيا، يلعب دورا هاما جدا في عملية البحث والتطوير للابتكار البيولوجي الطب ،* تسريع تطوير الأجسام المضادة المخدرات .عرض بالعاثية التكنولوجياليس فقط يلعب دورا محوريا في اكتشاف وتحسين الأجسام المضادة الجديدة و البروتينية ، ولكن أيضا يمكن أن تكون جنبا إلى جنب مع التكنولوجيا المناعية الحيوانية التقليدية لرسو السفن على نحو فعال مع نانو الأجسام المضادة البشرية الماوس المعدلة وراثيا منصة الاكتشاف .يمكن أن تستخدم على نطاق واسع في مجال الأجسام المضادة ، والأجسام المضادة وكلاء اقتران ، car-t / tcr-t الخ .منتدىفي هذه الورقة ، تفاصيل انتشار الفيروس و التضخيم من عرض بالعاثية التكنولوجيا سيتم مناقشتها ، تجربة عملية محددة سيتم تقاسمها .

الجزء الثاني

مكتبة فج
أساسيات التضخيم وعرض

نظام عرض بالعاثية شظايا الضد" 3 + 3 نظام "البروتين قفيصة P3 فجن3 + 3البروتين قفيصة P3 يمثل مصدرين :

• phagemid ؛ phagemid ؛ phagemid
• m13ko7 مساعد فج

البكتيريا الحبيبية( phagemid P3 ) البروتين هو مفتاح التنوع في المكتبة عن طريق دمج الجينات من الأجسام المضادة شظايا .مساعد فج( مساعد phage P3 البروتين ) هو بروتين طبيعي فج P3 .
* phagocytic الجسيمات هي صغيرة نسبيا ناقلات البلازميد ، وارتفاع كفاءة التحويل في القولونية ، ويمكن توسيعها في القولونية .

القولونية التي تحتوي على جسيمات phagophage مصاب مساعد بالعاثية ، ثم يتم تضخيمه من قبل النظام الأنزيمي ، والمواد الخام والطاقة من كولاي ، وأخيرا ، فج تحتوي على جسيمات phagophage صدر من كولاي ، P3 البروتين قفيصة من ذرية فج عرض الأجسام المضادة شظايا .

الجزء الثالث

-- في عملية التضخيم فج
الصعوبات المصادفة والحلول المقابلة

بناء مكتبة فج هو في الواقع عملية نقل جزء من الأجسام المضادة التنوع الجيني :
عملية نقل الجينات من الأجسام المضادة في عينات الدم إلى phagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophagophago
نقل من البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد البلازميد .
نقل التنوع من القولونية التي تحتوي على البكتيريا phagophagocytes إلى التنوع هو جزء مهم من فج التضخيم .

الهدف النهائي من تضخيم فج هو تحويل نسخة واحدة من الأجسام المضادة جزء من الجينات في phagophages إلى 10 إلى 100 نسخة .هذه نسخ الجينات يمكن أن تظهر الأجسام المضادة شظايا البروتين على سطح بالعاثية P3 البروتين .

من أجل الحفاظ على التنوع ونقلها من خلال تضخيم بالعاثية ، عدد وحجم البكتيريا القولونية التي تحتوي على جسيمات phagocytic أثناء عملية التضخيم يجب أن تكون مصممة على أساس الحجم الأولي من المكتبة ، وعدد من البكتيريا التي تحتوي على جسيمات phagocytic فعالة للعدوى ، وعدد من البكتيريا التي تحتوي على جسيمات phagocytic تضاف بعد التضخيم يجب أن تحسب وتقييمها .حجم التضخيم من فج المكتبات تختلف مع حجم المكتبة .علاج التجربة قد يؤدي إلى فقدان التنوع في المكتبة .
من أجل حل هذه المشاكل ، أولا وقبل كل شيء ، يجب أن يكون لديك المعرفة الأساسية التالية :

( أ ) 👇 كل ما يلي هو التركيز ! و

1. TG1 كولاي في القراءة OD600 : 1OD يمثل تركيز البكتيريا 1E9 / مل .
2. وأظهرت النتائج أن معدل الإصابة بالعاثية / مساعد فج كان أفضل عندما tg1 كان لوغاريتمي * od600 TG1 كان لوغاريتمي * 0.4-0.8 . . . . . . .
3. tg1 في لوغاريتمي * معدل النمو هو 20 دقيقة من الجيل ، تحتاج إلى إيلاء اهتمام وثيق tg1 النمو ، في الوقت المناسب للحصول على البكتيريا لإجراء التجارب .4. نسبة مساعد فج TG1 وزارة الداخلية يضمن أن جميع tg1 مصاب في 20 : 1 .
5. البكتيريا التي تحتوي على جزيئات يمكن أن تصيب البكتيريا العادية tg1 القولونية ، ثم ترك جزيئات في tg1 وتضخيمها مع tg1 التضخيم .
6.بلعم البلازميد يحتوي على * المقاومة ، مساعد فج يحتوي على * المقاومة .
7. بالعاثية التي تحتوي على جزيئات phagophagocytic يمكن الكشف عنها من قبل التتر من الطبيعي TG1 ، التدرج تمييع المغلفة مقاومة أجار لوحة .8.في 3 + 3 طريقة عرض بالعاثية P3 فيوجن الأجسام المضادة جزء من البروتين مع انخفاض الكفاءة ، فقط 5 ٪ - 10 ٪ ، في عملية الاستخراج ، إضافة بالعاثية عيار ينبغي أن يكون أكثر من 100 مرة من مكتبة التنوع .
هناك مشكلة رئيسية أخرىفيروس مثل فيروس ، يمكن بسهولة أن تنتشر في الهواء في شكل الهباء الجوي وتلوث البيئة في المختبر ، مما يؤدي إلى إصابة و عامل إيجابية الإشريكية القولونية .وجع القلب البيولوجية وانغ ، خاطر بحياته لنقل الطوب آه !
في .عرض بالعاثيةتحتاج إلى القيام به في مختبر مغلق نسبيالتجنب التلوث بالعاثية القولونية ،وخاصة في الثقافة العادية tg1 كولاي . طريقة تعطيل الفيروس هو عادة أكثر من نصف ساعة من التعرض للأشعة فوق البنفسجية .
مخلوق مؤهل وانغ ، هو شعور مو الفيروس القاتل !

الجزء الرابع

- توسيع فجزيادة كمية
تقاسم عملية تجريبية محددة

وفيما يلي عرض بالعاثية مكتبة مع حجم 1e9 . . . . . . .
* إذا كانت المكتبة كبيرة جدا أو صغيرة جدا ، يمكن زيادة أو نقصان حجم التضخيم النسبي .

اليوم الأول
( نقل الطوب الصلع اليوم )

1. tg1 سلالة تحتوي على جسيمات phagophagocytic أضيفت إلى 250 مل قارورة تحتوي على 100 مل 2xyt-ga متوسطة .استخدامأوهاس شاكر37 درجة 220rpm شاكر شاكر OD600 حوالي 0.5منتدى2. 20 مل ( عدد البكتيريا 1 E10 ) مع od600 حوالي 0.5 تم الحصول عليها ، ثم مساعد بالعاثية M13 k07 و 37 درجة 220rpm تتأرجح لمدة نصف ساعة حسب وزارة الداخلية 20 : 1 .3. بعد أخذ العدوى البكتيرية السائل إلى 50 مل أنبوب الطرد المركزي للاستخدامأوهاس 5816r الطرد المركزي3200g الطرد المركزي لمدة 10 دقائقإزالة الجلوكوز من متوسطة الثقافة يمكن أن تمنع التعبير عن بروتين P3 تنصهر مع الأجسام المضادة جزء من البروتين .4. تعليق الكتلة الحيوية في 2xyt-ak متوسطة ، إضافة إلى 400 مل ، يهز لمدة 30 درجة 220rpm بين عشية وضحاها في 1 لتر زجاجة .

اليوم الثاني
( في اليوم التالي لنقل الطوب أصلع )

5.تقسيم 400 مل من البكتيريا في زجاجة الطرد المركزي .استخدامأوهاس 5816r الطرد المركزي 10000g الطرد المركزي لمدة 10 دقائق، إزالة طاف ، 10000g الطرد المركزي مرة أخرى لمدة 10 دقائق ،إزالة بقايا شظايا .6. 90 مل شماعة الحل أضيفت إلى 400 مل طاف ، احتضنت في 4 ℃ لمدة 1 ساعة مع لينة التذبذب .مع وظيفة التحكم في درجة الحرارة المنخفضةأوهاس 5816r الطرد المركزي الطرد المركزي 1 ساعةمنتدى7. بعد تعليق 10 مل من برنامج تلفزيوني ، 2.5ml شماعة أضيفت إلى إعادة هطول الأمطار .8. فقست على الجليد لمدة 20 دقيقة ، ثممع وظيفة التحكم في درجة الحرارة المنخفضةأوهاس 5816r الطرد المركزي4 ℃ 10000g الطرد المركزي لمدة نصف ساعةمنتدى9. بعد إزالة طاف ، شماعة الحل تم امتصاصه من قبل ورقة ماصة ، 1-2ml برنامج تلفزيوني تعليق فج أضيفت إلى تحديد عيار .

عيار التصميم :
1. في المختبر ، tg1 كولاي أضيفت إلى 2xyt متوسطة .استخدامأوهاس شاكرهزاز إلى قيمة od600 0.5إذا كان لا يمكن استخدامها في الوقت المناسب ، يمكن وضعها في 4 ℃ لمدة 2 ساعة .
2.في الخطوة 9 ، 1e5-1e7 مرات من برنامج تلفزيوني كان مخفف من تضخيم فج الحل .
3. 10ul فج مخفف أضيفت إلى tg1 القولونية مع 490ul od600 0.5 .استخدامأوهاس شاكر 37 ℃ 220rpm التذبذب لمدة نصف ساعةتحمل العدوى .
4. 50ul من عدوى السائل بالتساوي المغلفة في أجار لوحة تحتوي على 2xyt-ga ، ثم تجفف في 37 ℃ حاضنة بين عشية وضحاها . أجار لوحة المغلفة مع غير مصاب tg1 كولاي كانت سلبية السيطرة .

اليوم الثالث
( اليوم الثالث لنقل الطوب أصلع )

5. استنساخ عدد من 2xyt-ga أجار لوحة ، عيار تضخيم فج حسبت حسب تخفيف متعددة .
فج عيار ( PFU / مل ) = 10 * 50 / 10ul * تخفيف متعددة
6.إن 1e11-1e12 فج كان يستخدم في استخراج .

الكواشف الوصفة :
2XYT متوسطة :استخراج الخميرة 10.0 g / L + تريبتون 16.0 g / L + NaCl 5.0 g / L
2XYT جا متوسطة :2xyt متوسطة + 100 ميكروغرام / مل * 1 ٪ ( ث / ت ) الجلوكوز
2xyt-ak متوسطة :2xyt متوسطة + 100 ميكروغرام / مل * 50 ميكروغرام / مل *
PEG溶液：20٪ (w / v) PEG 6000 ، 2.5 م NaCl

الجزء الخامس
الصكوك

كل يوم أن تفعل البحث العلمي للعمال المهاجرين ليست وحدها ، لأن هناك القليل من النمساوية مرافقة .

فج هو نوع من الفيروسات التي يمكن أن تنتشر بسهولة في الهواء في شكل الهباء الجوي وتلوث البيئة في المختبر .
أوهاسثابت درجة الحرارة ضوء تحميل ثقافة الروكمدى سرعة الدوران هو 100-12 دورة في الدقيقة ، وحجم المكثف ، وظيفة قوية ، ويمكن أن توفر لك مع عينة تأثير هزاز ممتازة :

وبالإضافة إلى ذلك ، فإن عملية عرض بالعاثية التجربة سوف يكون حجم مختلف ، سرعة دوران مختلفة ، والحاجة إلى 4 ℃ الطرد المركزي خطوة .أخذمتعدد
الجدول الطرد المركزيتلبية متطلبات التجربةسوف يؤدي إلى تجربة المعدات والأصول الشاغرة ، مما تسبب في * النفايات !! يا إلهي! يا إلهي

أوهاس5816r متعددة الوظائف الطرد المركزيو اختياري الدوار لتسهيل التجارب ذات الصلة بالعاثية ، الطرد المركزي لتلبية جميع الاحتياجات التجريبية !

المقبل ، شياو آو يأخذك على متن الطائرة .
" تساعدك على توفير المال على البحث العلمي " هذه السيارة
يعلمك الحق في الحب مع أووهاوس الصوف

ألمانيا*
وظيفة قوية وممتازة تأثير الطرد المركزي
اوهاس فرونتير ™ الطرد المركزي الأسرة
أطلق" شراء واحدة تعطي واحدة "الأنشطة

* نموذج على النحو التالي
مايكرو عالية السرعة الطرد المركزيFC5515R( تجميد نوع )
مايكرو عالية السرعة الطرد المركزيFC5515( غير مبرد نوع )
ضغط جديد مايكرو الطرد المركزيFC5513
الحصول على الحافلة الآن ، لا يزال هناك متسع من الوقت !

يرجى ختم ملصق للحصول على مزيد من التفاصيل ، يرجى مسح رمز ثنائي الأبعاد 👇

تريد أن تعرف المزيد عنمختبر أوهاسالمعلومات ؟ من فضلك أدخلقراءة النص الكاملترك المعلومات ، والمهندسين المحترفين لدينا سوف تأتي بسرعة لخدمتك !
س